研究背景：

胰腺為人體內僅次于肝臟的第二大腺體，是內外分泌混合腺，包括兩個主要系統：內分泌系統和外分泌系統，前者負責生產和分泌激素，后者約占胰腺的 90%，包括生產和分泌消化酶的細胞。胰腺腺泡細胞中高水平的核糖核酸酶和蛋白酶消化酶影響了mRNA的提取，限制了對胰腺疾病發病機制的深入理解。

研究現狀：

目前對于正常胰腺組織消化方案的研究仍存在較多挑戰，胰腺樣本制備單細胞懸液的難度較大，常見的消化方案并不能獲取到更加全面的細胞類型。例如，2021年一篇發表在Science上的文章通過其消化方案得到了相對全的細胞類型分群結果，但仍然存在部分缺失。

因此，烈冰結合以往項目經驗，針對性地改良了小鼠正常胰腺單細胞懸液制備方案，優化組織解離條件，并采用烈冰自主研發的 Novelcyto 單細胞平臺進行細胞捕獲，獲得了高質量數據分析結果及較全面的胰腺組織細胞類型。

實驗流程——嚴謹專業、環環相扣：

首先將獲取到的樣本組織剪碎到1-2mm³，加入小鼠正常胰腺組織專用解離試劑，37℃水浴震蕩進行組織消化；然后，及時終止消化反應，細胞懸液通過70μm濾網于50ml管中，離心去上清獲得細胞沉淀；通過紅細胞裂解液去除殘留的成熟紅細胞；隨后，通過2-3輪的離心，清洗并回收高質量細胞；最后，對單細胞懸液進行質檢，確定細胞活性、數量及背景情況。

將獲取到單細胞懸液進行懸液質檢，活性及細胞數均符合上機標準；使用烈冰自研NovelCyto平臺進行細胞捕獲，隨后完成文庫構建，上機測序。

實驗所用單細胞捕獲系統為烈冰自研單細胞平臺——NovelCyto^TM v1.0（5888元/樣），高質量、高效率、高性價比的單細胞測序新方案.

數據結果

通過CytoNavigator^TM單細胞數據分析系統進行數據分析，獲得了高質量的數據結果及豐富全面的胰腺組織細胞類型，詳細數據情況展示如下：

1、細胞質控結果

測序數據均達高質量水平，默認按UMI500條件篩選細胞。捕獲細胞數為8139，Mean Reads per Cell約42K，符合單細胞數據分析標準；Fraction Reads in Cells達到了理想值80%左右；中位基因值：1,421、測序深度：42,138、中位數UMI、基因總值等關鍵參數的數據分析指標均表現出色。

2、數據標準化處理

在初始數據質控和表達量統計后，CytoNavigator^TM單細胞數據分析系統在分析過程還會對死細胞、雙細胞、低質量細胞等多種可能存在的偏差因素進行數據標準化校正，力求獲得準確無偏差的預處理后的單細胞基因表達數據。

篩選閾值：MT≤ 0.2、200 ≤ nFeature ≤10000

3、胰腺樣本細胞類型鑒定

烈冰方案大類細胞群體分別鑒定出腺泡細胞、導管細胞、內分泌細胞、內皮細胞、淋巴內皮細胞、間皮細胞、星狀細胞、周細胞、單核巨噬細胞和T細胞，同時也鑒定出了B細胞、中性粒細胞和施旺細胞的特征基因表達。細胞分群清晰，基于細胞聚類分析的結果，實現多種細胞的無偏捕獲。

4、胰腺樣本細胞類型占比統計

烈冰CytoNavigator單細胞數據分析系統

烈冰單細胞可視化平臺

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優勢總結

綜上所述，烈冰改良消化方案對于疑難樣本——小鼠正常胰腺組織單細胞懸液制備的效果優異，同時NovelCyto微孔法重力沉降單細胞捕獲方案在中位基因數、UMI Counts數、mapping率等關鍵指標上均呈現高質量的結果，胰腺樣本細胞類型豐富全面。搭配烈冰CytoNavigator^TM單細胞數據分析系統與高標準的細胞質量控制，準確反映出細胞的轉錄狀態，產出高質量的實驗結果！

烈冰制造

目前烈冰生物已自主研發多項儀器設備：

【烈冰智造】全流程國產化單細胞轉錄組解決方案將持續推動科學研究和精準醫療的發展。烈冰出品，必屬精品，一站式精準服務，要做就做最懂你的單細胞平臺！

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