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Single Cell Sequencing
單細胞測序技術（single cell sequencing）是指在單個細胞水平上，對基因組、轉錄組、表觀組進行高通量測序分析的一項新技術，它能夠彌補傳統高通量測序的局限性，揭示單個細胞的基因結構和基因表達狀態，反映細胞間的異質性。
2013年，《Science》將其列為年度最值得關注的六大領域榜首；2015年再次登上Science轉化醫學封面。2018年躋身Science 年度突破技術； 2019年，單細胞多組學被列為Nature Methods年度技術，2021年，又被評選為10大創新生物科技之一...目前，單細胞測序技術在腫瘤、發育生物學、微生物學、神經科學、以及植物學等領域發揮重要作用，正成為生命科學研究的焦點，具有廣闊的應用前景。
單細胞轉錄組測序流程--點我了解更多
1. 單細胞測序技術：公司擁有行業認可的10X Genomics、BD Rhapsody以及烈冰自研的單細胞平臺，實現高質高效的單細胞測序。
2.多樣化的樣本處理經驗：公司具有豐富的單細胞懸液制備經驗，50+組織類型，100+細胞類型、10000+樣本處理經驗，確保細胞的活性能夠達到測序要求，從而獲得可靠的單細胞數據。
（圖片來源于網絡）
3.高效的文庫構建技術：公司擁有成熟的單細胞測序文庫構建技術和自動化建庫平臺，一次性完成1000-10000個細胞的文庫構建。
4.完善的質控流程和數據分析經驗：烈冰自研的CytoNavigator 百萬級通量數據分析系統確保數據的可靠性和質量，同時能夠提供個性化、定制化的數據分析服務，幫助研究人員從海量的單細胞數據中獲取有意義的信息。
樣本類型：
組織、血液、培養的細胞系、制備好的單細胞懸液
注：若客戶樣本為組織，且無能力進行組織解離來獲取單細胞懸液，烈冰將盡可能提供技術及實驗上的幫助，但因不同類型樣本的特異性，無法保證實驗方法適用于所有類型組織。
質量要求：
1. 細胞活性大于70%
2. 濃度為500-2000細胞/μl
3. 體積不小于200μl
4. 細胞培養基及緩沖液不能含Ca2+和Mg2+
5. 細胞體積小于40μm
1. 單細胞懸液制備：根據樣本特性選擇合適的單細胞懸液制備方法，注意紅細胞裂解；如若客戶樣本為已經制備好單細胞懸液，該步驟可以省略；
2. 細胞活性檢測：細胞活性需大于70%；
3. 單細胞捕獲：通過分選平臺（BD、10X、Drop-seq）對每個細胞進行捕獲；
4. 細胞/轉錄本標簽添加：對結合磁珠標簽的RNA進行逆轉錄引入CB和UMI；
5. 文庫構建：對cDNA進行隨機引物PCR擴增；
6. 上機測序：烈冰推薦Illumina Hiseq或NovaSeq測序平臺，數據量100G/樣本。
注：橫坐標為細胞數量，縱坐標為每個細胞對應的平均counts數，根據曲線的斜率判斷實際檢測的細胞數量
注：左圖為細胞中總共檢測到的基因數量，右圖為去除重復UMI后統計的基因數量
注：左圖為每個細胞中的線粒體占比——nUMI數量相關性分析圖，
右圖為單細胞測序中每一個細胞的基因——nUMI數量相關性分析圖
Chen, et al. Nature Cell Biology, 2021 Jan;23(1):87-98.
注：左圖為前列腺腫瘤組織細胞亞群鑒定t-SNE圖展示；右圖為不同樣本中各細胞亞群的占比情況
Zhang, et al. Glia, 2021 Mar;69(3):765-778.
注： Marker基因的Feature Plot圖和Violin圖
Zhang, et al. Glia, 2021 Mar;69(3):765-778.
Zhang C, et al. J Immunother Cancer, 2021;9:e002312.
Chen, et al. Nature Cell Biology, 2021 Jan;23(1):87-98.
Chen, et al. Nature Communication 2020; 11:5077
Chen, et al. Nature Cell Biology, 2021 Jan;23(1):87-98.
Chen, et al. Nature Cell Biology, 2021 Jan;23(1):87-98.
Sun, et al. Annals of the Rheumatic Diseases, 2019, 79(3):215926.
注：細胞間狀態轉換的pesudotime軌跡圖（左）和Heatmap圖（右）
Chen, et al. Nature Communication, 2020;11:5077.
注：橫坐標表示細胞類型，縱坐標表示細胞間通訊關系，圓圈大小表示顯著性差異水平，圓圈顏色越紅表示細胞間通訊關系越強
Zhang C, et al. J Immunother Cancer, 2021;9:e002312.
注：橫坐標表示生存期，縱坐標表示占比，不同顏色曲線代表不同分組
烈冰助力文獻：
[1] Antiandrogen treatment induces stromal cell reprogramming to promote castration resistance in prostate cancer，Cancer cell，2023 IF=50.3
[2] A multimorphic mutation in IRF4 causes human autosomal dominant combined immunodeficiency，Science Immunology，2023 IF=24.8
[3] Tumor-intrinsic YTHDF1 drives immune evasion and resistance to immune checkpoint inhibitors via promoting MHC-I degradation，Nature Communications，2023，IF=16.6
[4] ECSIT Is a Critical Factor for Controlling Intestinal Homeostasis and Tumorigenesis through Regulating the Translation of YAP Protein，Advanced Science，2023，IF=15.1
[5] Systemic immune dysregulation in severe tuberculosis patients revealed by a single-cell transcriptome atlas，Journal of Infection，2023，IF=28.2
[6] Single-cell and spatial dissection of precancerous lesions underlying the initiation process of oral squamous cell carcinoma，Cell Discovery，2023，IF=33.5
[7] Immunosuppressive CD10+ALPL+ neutrophils promote resistance to anti-PD-1therapy in HCC by mediating irreversible exhaustion of T cells， Journal of Hepatology，2023，IF=25.7
[8] CD_99 G1 neutrophils modulate osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells in the pathological process of ankylosing spondylitis，Annals of the Rheumatic Diseases，2023 IF=27.4
[9] Targeting VEGF-A/VEGFR2 Y949 Signaling Mediated Vascular Permeability Alleviates Hypoxic Pulmonary Hypertension，Circulation，2022 IF=37.8
[10] A rice single cell transcriptomic atlas defines the developmental trajectories of rice floret and inflorescence meristems,New Phytologist,2022 IF=10.15